一、蛋白质除盐的方法有哪几种简述其原理?
蛋白质除盐的方法有哪些?如何做能够在除盐的过程中不过分的稀释蛋白质?
答题思路:
首先,当遇到分离纯化题目的时候,我们脑海中先归纳出分离纯化的各种方法以及依据。
根据分子大小不同:透析、超过滤、密度梯度离心、凝胶过滤、SDS-PAGE凝胶电泳。
根据溶解度差别:等电点沉淀、盐溶、盐析、有机溶剂分离沉淀。
根据电荷不同:各种电泳、离子交换层析
选择性吸附和利用对配体特异亲和力的纯法方法:亲和层析。
显然,蛋白质脱盐,是将蛋白质与小分子物质分开。上面的方法中,根据溶解度差别这几种方法还得加盐,与脱盐的目的背道而驰。这里面的等电点沉淀能不能行呢?如果原先蛋白质溶液中没有盐,那么我们将pH调整到某个蛋白质等电点,这种蛋白质就可能沉淀下来这时候肯定没有加盐。但是我们现在的体系中是有盐离子的,我们把盐析下来的蛋白质先加少量水溶解出来,这个时候我觉得因为溶液里有盐离子,溶剂的极性比较高,有一定盐溶的效果,所以等电点沉淀并不容易实现。
根据电荷的方法也不应该考虑,因为盐和蛋白质都是带电荷的,不好分离。
应该重点考虑根据分子大小不同的纯化方法。
透析能够分离蛋白质与离子,但是透析的过程中透析液会进入蛋白样品中,造成蛋白质的稀释。
凝胶过滤我们设置凝胶颗粒空隙小于蛋白质直径,这样蛋白质不经过凝胶内部首先被洗脱下来,而离子则进入凝胶颗粒内部。但是在洗脱的过程中蛋白质样品必然会被洗脱液稀释
二、除了凝胶层析脱盐的方法,还有什么脱盐的方法?
你要脱盐的物质是什么呀,我讲下蛋白的吧.
1.用透析法,不过这种方法只能用于少量蛋白的脱盐.
2.可以用丙酮沉淀蛋白除盐,因为这种方法是使蛋白变性沉淀下来而除盐,这种方法可能会使部分蛋白丢失或失去活性.
3.盐析,用硫酸铵,氯化钠等中性盐等沉淀蛋白而除盐
三、蛋白质脱盐有哪些方法
常用的脱盐方法有透析法、电透析法和凝胶过滤法。透析法及电透析法耗时长,样品稀释度大,不易放大进行大规模生产,所以工业生产中应用较少。凝胶过滤层析脱盐过程中盐分子和蛋白质分子大小差异巨大,蛋白质溶液中小分子的盐分子随着层析流动相进入孔径较小的固定相,使其在层析中的迁移速率小,而蛋白质因分子尺寸较大,不能随流动相进入固定相中,因此在层析柱中的迁移速率大,首先从层析术中流出,实现脱盐。
用凝胶过滤法脱盐时,为了使盐同蛋白质充分地分离,除了应选用足够长的层析柱之外,还应对样品的体积加以限制。样品的体积如果过大就导致蛋白质带同盐带不能分开。一般来就,样品体积不超过床体积的30%。这一数据的确定是根据盐和蛋白质的分离体积(Vsep)决定的。两种物质分离体积的定义为,当两种物质的混合物在凝胶过滤层析柱上能够完全分离时的最小体积。